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影响电泳迁移率的因素

发表时间:2019-10-24 00:00

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DNA分子大小迁移速率V与logN成反比(N为碱基对数目)。分子越大,摩擦阻力越大,同时大分子通过凝胶孔径的效率也低于较小的分子,所以分子大的迁移慢。 等量的空间结构,紧密的电泳快(超螺旋>线性DNA) 一般来说,分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。

简言之,浓度越大,分子孔径就越小,DNA迁移速率就越低,反之,迁移速率就大。 另外,浓度也跟凝胶的分辨率有关,浓度越大,分辨率越高,但分离的DNA片段就越小。

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一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。

低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。使分辨效果好,凝胶上所加电压不应超过5-8V/cm

包括标准琼脂糖和低熔点琼脂糖以及正在研制的介于二者之间的琼脂糖。其分辨率等各有不同。

琼脂糖凝胶的浓度

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溶液pH值距离其等电点愈远,其所带净电荷量就越大,电泳的速度也就越大,尤其对于蛋白质等两性分子,缓冲液pH还会影响到其电泳方向; 溶液的离子强度过低,会使电导率降低,DNA不是全然不动就是迁移极慢;而离子过强时,电导率上升,会产生大量热能,使凝胶变化甚至熔化,也会使DNA变性。

染色剂溴化乙锭插入双链DNA造成其负电荷减少、刚性和长度增加,因此,线性DNA-染料复合物在凝胶中的迁移率约降低15%。

影响电泳迁移率的因素

研究结果表明:在低浓度、低电压下,分离效果较好。在低电压条件下,线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。但是,在电场强度增加时,较大的DNA片段迁移率的增加相对较小。因此随着电压的增高,电泳分辨率反而下降,为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率,电场强度不宜高于15V/cm。一般在5-10v之间。 电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳,只有当凝胶浓度低于0.5%时,为增加凝胶硬度,可在4℃,进行电泳。

DYCP-31DN 小型琼脂糖水平电泳仪

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凝胶成像分析系统

凝胶成像分析系统:WD-9413A/B/C

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