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电泳

发表时间:2019-10-24 00:00

电泳


电泳是带电颗粒在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象。 在一定pH条件下,每一种分子都具有特定的电荷(种类和数量)、大小和形状,在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同,各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。

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影响泳动度的因素

1. 电场强度:

电场强度是指每厘米的电位降,也称电位梯度(电势梯度)。电场强度越高,则带电颗粒泳动越快。根据电场强度的不同,电泳可分为: 常压(100-500V)电泳。其电场强度为2-10V/cm。分离时间较长,从数小时到数十小时 ,适合于分离蛋白质等大分子物质。如我厂生产的DYY-6D、 6C、 8C等 高压(2000-10000V)电泳。其电场强度为50-200V/cm,电泳时间很短,有时只需几分钟。多用于分离氨基酸、多肽、核苷酸、糖类等小分子物质。如DYY-15D、 DYY-12型、 DYY-12C、 DYY-10C、 DYY-11型

2 溶液的性质

1)PH值

溶液的PH决定带电颗粒的解离程度,也即决定其带静电荷的量。对蛋白质而言,溶液pH值离等电点越远,则颗粒所带的净电荷越多,泳动速度也越快;反之,则越慢。因此分离某种蛋白质混合液时,应选择合适的pH,使欲分离的各种蛋白质所带的电荷数量有较大的差异

2)离子强度

溶液的离子强度一般在0.02-0.2之间,电泳较合适。若离子强度过高,则会降低颗粒泳动速度;若离子强度过低,则缓冲能力差,往往会因为溶液PH值的变化而影响泳动度的速率

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3)溶液黏度

泳动度与溶液黏度是成反比关系

3 颗粒性质

颗粒直径、形状以及所带静电荷量对泳动度有较大的影响。一般来说,颗粒的静电荷量越大,或其直径越小,或其形状越接近球形,在电场中的泳动速度就越快。反之,则越慢

4 电渗

电泳缓冲液相对于固体支持物的移动称电渗。当支持物不是绝对惰性物质时,常会因为支持物上存在的离子基团如羧基、羟基等吸附电极溶液中的正离子,使靠近支持物的溶液层相对带电,向负极移动,反之,若支持物的离子基团吸附溶液中的负离子,则溶液层向正极移动。电渗作用会影响颗粒的泳动度,因此,在电泳时,电渗小些为好。

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5 焦耳热 电泳时会产生焦耳热,使介质粘度下降,分子运动加快,迁移率增加,同时温度过高会使样品中的生物大分子变性失活,因此电泳时,要控制电压或电流,也可安装冷却散热装置。如我厂生产的DYCZ-24EN,DYCZ-24F,均具有冷却循环装置,可与WD-9412A型恒温循环器配套使用

Q=I2Rt

Q-释放出的热量,I-电流强度,R-电阻,t-电泳时间

6.支持物

现代电泳多在固体支持物上进行,使样品中的不同组分形成不同的区带,称区带电泳。电泳结束后,支持物可以方便地进行染色等后续处理。 对支持物的一般要求是均匀,吸附力和电渗小,机械性能好,便于染色或紫外光下检测,故最好透明,无紫外吸收。常用支持物有滤纸,醋酸纤维素薄膜,淀粉凝胶,聚丙烯酰胺凝胶,琼脂糖凝胶等 支持物性质不同也会影响泳动速率,如琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶都有大小不同的筛孔,在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快,反之则慢。


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